实验室动物组织研磨方法步骤及注意事项

　　在实验室中，某些对于动物的研究课题试验，往往需要先将动物组织进行研磨前处理，而手动研磨不容易达到预期的研磨效果，不能获取到合格的检测样品。实验室研磨动物组织，我们可以借助专用的动植物组织研磨仪器，简便且有效，下面天津东方天净就来详细介绍下动物组织研磨方法步骤及注意事项。

TJG动植物组织研磨仪

动物组织研磨前处理步骤

一、实验前的准备

1、在实验操作前，先将PBS缓冲液(磷酸缓冲盐溶液，phosphate buffer saline)进行4℃预冷，然后准备若干冰块备用。

2、使用75%浓度的乙醇溶液对镊子、剪刀进行消毒处理，如果还需对动物组织进行RNA提取，还要使用酒精灯对镊子和剪刀进行再次消毒，以尽可能消除RNA酶。

3、所有实验耗材都应进行高温高压灭菌，以保证各种酶不会对后续实验产生影响。

4、将2ml离心管置于冰块上，并加入适量的PBS缓冲液，一般情况下，实验所需的组织匀浆的质量体积比为10%(即0.1g组织样本加入1ml液体)。

5、将需要进行研磨的组织样本从零下80℃的冰箱内取出，置于冰上，使用灭菌后的镊子和剪刀，将样本切成小块(每块重量不宜超过0.02g，总重量不宜超过0.2g)，然后放入加好相应液体的离心管中，备用。

冰箱

6、取出已经灭菌的氧化锆研磨球，按照每个离心管一颗的数量，将锆球放入离心管中。此过程需使用镊子进行该操作，并且尽量避免液体飞溅而导致样本污染。

二、组织研磨

1、将放入样品和锆球的离心管标记好编号，然后放入专用的研磨适配器中，盖好盖子，将适配器固定在研磨机上。

装有样本的离心管

离心管编号

2、设置振动频率为1000次/分钟，振动时间为5分钟。

TJS三维振动球磨机

3、由于振动过程中的撞击和摩擦，会产生大量热量，使得离心管温度升高，所以可以选择具有低温控制功能的设备，或者将适配器放入液氮罐进行预冷冻，并减少研磨时间，避免高温对样本的破坏。

三、组织上清的吸取及保存

1、将研磨完成后的离心管放入低温环境下的高速离心机内，以4000rpm的速度离心30分钟。

2、将所得的上清液用移液器取出，转入至新的离心管内，并于零下80℃的环境长期保存。

装有上清液的离心管

动物组织研磨前处理注意事项

1、需要研磨的样本一定要在冰上操作，保证低温环境，这样可以降低样本中蛋白质(或RNA)的降解速度。

2、所有实验操作均需佩戴医用口罩、手套，并且穿戴好实验服。

3、在进行离心操作前，需要提前开启离心机，让离心机预冷，保持4℃左右的低温环境。

4、研磨使用的氧化锆研磨球一定不能多放，数量过多会导致管壁破裂，从而造成样本丢失或污染。

5、使用移液器吸取上清液时，不要吸取到沉淀。

附：实验所需仪器、工具及试剂

　　仪器：TJS三维振动球磨机、低温高速离心机

　　工具：研磨适配器、氧化锆研磨球、移液器、手术用剪刀、2ml离心管、镊子

动物组织研磨适配器

　　试剂：PBS缓冲液、RIPA裂解液、75%浓度乙醇溶液、Trizol试剂

　　关于实验室动物组织研磨的方法步骤及相关注意事项就为大家介绍到这里了，使用东方天净TJG-215动植物组织研磨仪或TJS三维振动球磨机，搭配研磨适配器，就能将各类动物组织进行快速有效的研磨。